琼脂糖凝胶怎么配制？

你好，琼脂糖凝胶的配制是分子实验室比较基本的操作，因此正确地操作对整个实验来讲很有必要，大体流程如下：称量、熔胶、倒胶、拔梳。1.称量我们通常所说的0.8%、1%的胶都是指的质量体积分数，即所称取的琼脂糖粉的质量（g）比所加的TBE缓冲液的体积（mL）即胶的浓度。缓冲液的体积根据胶板的大小而定。如小胶板0.8%的胶需要琼脂粉0.104g，TBE13mL。2.熔胶将所称量的琼脂粉与TBE在锥形瓶中混合，在微波炉内反复加热2~3次至琼脂粉溶解并无气泡。3.倒胶干净的胶槽内摆好梳子，往胶内滴加1uL左右核酸染料，混匀，待冷却至不烫手，轻轻倒入胶板内。4.拔梳.待大约20min后，轻轻拔掉梳子（若不好拔，可以滴加适量的TBE缓冲液）。

把琼脂糖，即几乎不含硫酸根的主要成分为多糖的琼脂，溶于热水，倒入玻璃杯中，冷却制成的凝胶。融化后在37°C下可维持液态数小时，30°C时凝固成胶。即完成琼脂糖凝胶的配置。制成的小颗粒用于凝胶过滤，适于用sephadex不能分级分离的大分子的凝胶过滤，若使用5%以下浓度的凝胶，也能够分级分离细胞颗粒、病毒等。利用其吸附性小的特点，有时用它代替琼脂、以作为免疫电泳或凝胶内沉降反应的支持物。扩展资料：琼脂糖分为一般琼脂糖和经化学修饰后熔点降低的低熔点琼脂糖，琼脂糖的熔点在62〜65°C之间，多用于对染色体DNA在凝胶内进行原位酶切及DNA片段回收。琼脂糖凝胶由于孔径大常用于大分子蛋白质、DNA的分离。琼脂由琼脂糖和琼脂果胶两部分组成：作为胶凝剂的琼脂糖是不含硫酸酯的非离子型多糖，是形成凝胶的组分，其大分子链链节着1，3苷键交替相连的β-D-半乳糖残基和3,6-内醚-L-半乳糖残基。而琼脂果胶是非凝胶部分，是带有硫酸酯、葡萄糖醛酸和丙酮酸醛的复杂多糖，也是商业提取中力图去掉的部分。商品琼脂一般带有2%～7%的硫酸酯，0%～3%的丙酮酸醛及1%～3%的甲乙基。在工业上的琼脂色泽由白到微黄，具有胶质感，无气味或有轻微的特征性气味，琼脂不溶于冷水，易溶于沸水。琼脂系选用优质天然石花菜、江蓠菜、紫菜等海藻为原料，采用科学方法精炼提纯的天然高分子多糖物质。琼脂为亲水性胶体，分有条状和粉末状，不溶于冷水，易溶于热水。琼脂在工业上具有独特的重要性，琼脂的浓度即使低至1%仍能形成相当稳定的凝胶，是食品工业、化学工业、医学科研所必需之原料。参考资料来源：百度百科-琼脂糖凝胶参考资料来源：百度百科-琼脂

有不同的浓度：1%、1.2%、2%、3%等一般用1%浓度的凝胶用来分离几百到几千bp大小的DNA。称好琼脂糖后，放入TAE或TBEbuffer中，用微波炉加热溶解，冷却至55℃时，加入少量EB或替代物，倒入模中，冷却凝固。

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